dsRNA不纯，包括转录副产物、残留DNA或者酶都有可能引起；如果是双端转录合成，产生的副产物会比单端转录的副产物多，单端转录主要是截短 RNA、异常折叠的单链 RNA，双端转录除截短产物外，大量全长 / 部分长度互补双链 RNA，是最主要副产物，双端转录建议换成单端转录，分别合成互补ssRNA后再退火成dsRNA。

https://cshprotocols.cshlp.org/content/2019/3/pdb.prot097469.full
10×退火Buffer: 200 mM Tris-HCl，750 mM KCl pH 7.5@25℃

核酸染料凝胶内染色的常见问题：1. DNA Marker拖带、条带分离不开，2. 样品条带与DNA Marker出现大小不一致。
其根本原因是：目前使用的大多数无毒染料都是大分子量染料。与核酸结合的染料会改变样品的分子量大小， 造成凝胶迁移，导致样品的大小与实际不符。
DNA Ladder中分子量较小的片段迁移速率快，先结合染料，率先到达饱和。较大的片段迁移率慢，需要更长时间才能达到饱和。在这个过程中造成的分子量偏差和较大片段分离不开，是事实存在的。
推荐解决方案：1. 降低Marker上样量，2. 电泳后泡染法染胶。

1. 胶浓度不合适，根据实际情况推荐合适制胶浓度。
2. 核酸染料胶内染料，Marker上样量过高或者电泳时间短。核酸染料胶内染胶推荐Marker上样量窄孔1 μl，宽孔2 μl，如果搭配我司核酸染料需电泳电压控制在4~6 V/cm（总电压=4~6×电泳槽正负极之间的长度）电泳。

Green在紫外激发下比蓝光照胶更亮可能有以下几个因素：
1. 紫外光源功率远高于蓝光，单位时间激发效率悬殊荧光信号的初始强度与激发光功率直接相关。若紫外光源（如 254 nm 或 302 nm 透射仪）的实际输出功率远高于蓝光光源（如 488 nm 激发灯），即使紫外仅曝光 3 秒，其单位时间内激发的染料荧光量可能是蓝光的 10 倍以上。
2. 成像系统对紫外激发的荧光检测效率更高：若成像系统的滤光片、CCD 传感器对紫外激发后染料的发射光（约 520~540 nm）更敏感，即使紫外激发的荧光总量与蓝光接近，检测到的信号也会更强。
3. Green 的荧光可能在蓝光激发下更易发生淬灭（如染料浓度过高时，分子间相互作用导致蓝光激发的荧光衰减更快），而紫外光的高能量激发可能减少淬灭效应（或淬灭阈值更高）。检查实验中的染料使用浓度是否较高。

如果是核酸染料加在胶里面：绝大多数核酸染料带正电；DNA 带负电，电泳时向正极（下方）跑，染料往负极（上方）反向迁移。上部分胶长期处在染料浓度充足的胶上部区域，持续结合染料，条带偏亮；下部分胶由于染料往上方迁移，小片段往下方迁移，结合染料浓度低，两者背道而驰，导致最终下部分胶小片段明显偏暗。一整块胶上下区域一起跑，电泳时间越长，这个现象越严重。建议小片段缩短电泳时间电泳。

外观：灰色固体粉末（偏深棕色）。
溶解外观：100mg/ml  深褐色溶液，会有少量沉淀。沉淀并不会影响溶液的活性。本品为粗提品，溶液会有少量沉淀属于正常现象。

用含钙镁HBSS溶解，-20℃ 1个月内可以用，暂无更长数据；
建议分装后单次使用不复冻，避免反复冻融，冻融影响活性。

未吸潮情况下，冻干粉5度可以放3年活性不下降。

I型：胶原酶≥125 U/mg，酪蛋白酶≥200 U/mg，梭菌蛋白酶≤4.0 U/mg，胰蛋白酶≤0.5 U/mg，适用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。
II型：胶原酶≥125 U/mg，酪蛋白酶≥200 U/mg，梭菌蛋白酶≥3.5 U/mg，胰蛋白酶≥0.1 U/mg，更高的蛋白酶活性，适用于心脏、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。
IV型：胶原酶≥160 U/mg，酪蛋白酶≥100 U/mg，梭菌蛋白酶≤3.0 U/mg，胰蛋白酶≤0.1 U/mg，低蛋白酶活性，适用于胰岛细胞制备。