在中等水平（0.5~1.0%离子和非离子去污剂）下，大多数糖苷酶显示出令人满意的活性或不受影响。例外情况是：PNGase F（所有产品）、O-糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶，它们会被SDS抑制。必须将NP-40添加到反应混合物中，使最终浓度为1%，以抵消去污剂的抑制。
常见的稳定试剂，如 吐温、Triton X-100、NP-40、辛基葡萄糖苷和非去垢剂磺基甜菜碱，以及痕量有机溶剂，可以阻止 PNGase F 对糖基又好又快的释放。

糖苷酶用于获取与糖蛋白和糖肽相连的糖基的信息。它们有两种类型，内切糖苷酶和外切糖苷酶。内切糖苷酶可以将整个糖基从蛋白质上切下来，而外切糖苷酶则从糖的非还原端去除单糖。还原端是指由内切糖苷酶产生的端。研究人员经常先使用内切糖苷酶，然后使用一种或多种外切糖苷酶，最后通过SDS-PAGE或各种类型的液相色谱分析产物。

糖苷酶可以在温和的条件下去除糖基，保持肽键的完整性。酶也可以在天然条件下用于折叠的蛋白质，尽管由于空间位阻和其他限制，它们的作用效率可能较低。

是正常现象，其主要组分是Na3PO4，低温会析出，解冻后恢复室温涡旋会复溶。

为获得最佳活性，一般需要Mg²⁺存在，其他一些金属离子也可以作为激活剂，效果由强到弱：Mg²⁺>Zn²⁺>Co²⁺>Mn²⁺>Ca²⁺

1. 实验模板中可能有抑制反应的组分或模板纯度较差或模板浓度不正确。
2. 若对照组产量正常，请重新纯化模板并确定模板浓度及其特异性。
3. 若对照组产量低，请咨询本公司技术支持。

转录起始片段短可能会抑制反应。转录产物100 nt时，建议延长反应时间或者增加模板量至2 μg。

模板序列中可能包含类似于T7 RNA聚合酶的终止序列。建议降低反应温度至30℃可能会增加全长转录本的比例，但是产量会下降。
可能模板中GC含量高或形成二级结构。建议提高反应温度至42℃或使用单链结合蛋白提高产量和长度。

质粒模板DNA可能酶切不完全。建议质粒模板DNA继续进行酶切或者重新优化质粒模板DNA制备酶切反应体系。
RNA可能存在更强的二级结构而未完全变性。增加变性剂的浓度或加完RNA Loading Buffer后样品变性温度可提高至70℃。

实验过程可能污染RNase。建议单独的转录反应操作区域、专用的RNA试剂及移液器；实验过程中佩戴口罩和手套，并经常更换手套；使用RNase-free耗材；试剂不使用时请盖好盖子；反应过程中保证试管紧密封闭。
模板可能有RNase污染。模板存在RNase污染也可能造成RNA产物片段小于预期，建议重新纯化模板 DNA 后用 Nuclease-Free Water 或 DEPC 处理水溶解。