(1) Marker上样量过多或曝光时间过长，可适当减少上样量或曝光时间。
(2) 二抗的浓度过高或特异性和纯度不高。
(3) 膜封闭不充分，背景高。

这种属于正常现象。pH、离子强度改变，预染修饰蛋白迁移率会变化。

不推荐，仅用于分子量参照，不能直接用于蛋白定量。

为获得最佳活性，一般需要Mg²⁺存在，其他一些金属离子也可以作为激活剂，效果由强到弱：Mg²⁺>Zn²⁺>Co²⁺>Mn²⁺>Ca²⁺

1. 实验模板中可能有抑制反应的组分或模板纯度较差或模板浓度不正确。
2. 若对照组产量正常，请重新纯化模板并确定模板浓度及其特异性。
3. 若对照组产量低，请咨询本公司技术支持。

转录起始片段短可能会抑制反应。转录产物100 nt时，建议延长反应时间或者增加模板量至2 μg。

模板序列中可能包含类似于T7 RNA聚合酶的终止序列。建议降低反应温度至30℃可能会增加全长转录本的比例，但是产量会下降。
可能模板中GC含量高或形成二级结构。建议提高反应温度至42℃或使用单链结合蛋白提高产量和长度。

质粒模板DNA可能酶切不完全。建议质粒模板DNA继续进行酶切或者重新优化质粒模板DNA制备酶切反应体系。
RNA可能存在更强的二级结构而未完全变性。增加变性剂的浓度或加完RNA Loading Buffer后样品变性温度可提高至70℃。

实验过程可能污染RNase。建议单独的转录反应操作区域、专用的RNA试剂及移液器；实验过程中佩戴口罩和手套，并经常更换手套；使用RNase-free耗材；试剂不使用时请盖好盖子；反应过程中保证试管紧密封闭。
模板可能有RNase污染。模板存在RNase污染也可能造成RNA产物片段小于预期，建议重新纯化模板 DNA 后用 Nuclease-Free Water 或 DEPC 处理水溶解。

dsRNA不纯，包括转录副产物、残留DNA或者酶都有可能引起；如果是双端转录合成，产生的副产物会比单端转录的副产物多，单端转录主要是截短 RNA、异常折叠的单链 RNA，双端转录除截短产物外，大量全长 / 部分长度互补双链 RNA，是最主要副产物，双端转录建议换成单端转录，分别合成互补ssRNA后再退火成dsRNA。