Cell-Free Protein Synthesis Kit
无细胞蛋白合成试剂盒
- EG24301S
- EG24301M
产品介绍
无细胞蛋白合成试剂盒（Cell-Free Protein Synthesis Kit）是一款基于大肠杆菌细胞裂解液进行体外蛋白质合成的产品。该产品利用细胞裂解液中的核糖体、翻译因子、酶等活性物质，同时补加能量、核苷酸、氨基酸、无机盐等，在体外重构转录-翻译体系。以DNA或RNA为模板，表达出蛋白质。无细胞蛋白表达是一种不依赖于活菌，能够快速、灵活地大量表达蛋白质，和传统的重组表达体系相比有众多的优势：
1.蛋白表达快，1~2 h即可表达出目的蛋白，8~24 h即可达到最大量。
2.蛋白表达量高，最高可达到3 mg/ml以上的蛋白。
3.反应简单灵活，仅需向反应体系中加入DNA或RNA模板，可使用96孔板或离心管进行反应。
注：本货号产品不适合可溶表达含二硫键的蛋白，不具备二硫键正确折叠的氧化环境；如需可溶表达含二硫键的蛋白，请联系其他货号。
产品组成
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组分 |
规格S |
规格M |
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Cell-free system solution A |
300 μl |
1.5 ml |
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Cell-free system solution B |
600 μl |
3 ml |
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CFPS-Control Plasmid |
2 μg |
2 μg |
储运条件
-80℃保存，有效期12个月。
干冰运输。用户开封后，将无细胞蛋白表达反应组分置于-80℃储存。
为避免反复冻融，可根据反应用量，将A液和B液分别分装后用液氮速冻后再置于-80℃储存。
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相关问答
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Q:
使用本品表达其他蛋白，是不是根据提供的质粒骨架进行替换 superfolder GFP 的CDS区域即可？
A:表达其他蛋白时，只替换superfolder GFP会残留N端的标签，如果不需要标签替换从ATG到TAA整个翻译区。
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Q:
质粒骨架的 T7 启动子→T7 终止子以外的质粒骨架序列是否可以替换？还是必须用您这边的骨架序列？
A:可以，例如pET9a、pET23a等质粒也可以，重点是T7启动子到T7终止子序列不建议替换，质粒骨架可以换。
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Q:
T7 promoter后面到蛋白的CDS区域质检的 5’UTR序列是否是您这边经过优化的？未进行标注的关键区域是否可以再进行序列优化和替换？
A:5’UTR是优化的，不建议替换。T7启动子到T7终止子区域不建议替换，如果该区域有优化需求可自行尝试优化，其它区域都可以优化和替换。
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Q:
加入模板DNA的最低浓度是多少？是否DNA模板加入量和蛋白表达效率相关？
A:模板DNA浓度低于4 ng/μl，会降低表达量。模板DNA加入量和蛋白表达量有关，建议根据蛋白优化，一般8 ng/μl左右就可以。
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Q:
相同模板的蛋白表达量组间差和批间差是否稳定，是否有相关数据？
A:相同模板的蛋白表达量组间差和批次差相对稳定，偏差约10%~20%左右。
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Q:
无细胞表达与传统大肠杆菌表达的区别是什么？
A:对比项
无细胞表达系统
传统细胞表达系统
定义
无细胞蛋白表达属于体外反应系统，无需完整活细胞，直接利用细胞提取物（含核糖体、酶、tRNA、氨基酸等翻译所需成分），在体外环境中完成转录和翻译。
传统大肠杆菌表达依赖活的大肠杆菌细胞，通过将目的基因导入细胞，利用细胞自身的转录、翻译机制（体内环境）合成蛋白。
实验流程
模版制备→无细胞反应
质粒构建→转化大肠杆菌→筛选阳性克隆→扩大培养→诱导表达→收集细胞→裂解纯化
耗费时间
1~2 h 即可表达出目的蛋白，8~16 h 即可达到最大量
时间数天到数周
特殊蛋白表达
可表达各种类型的蛋白，包括毒性蛋白、富含二硫键蛋白
或难溶蛋白
毒性蛋白、富含二硫键蛋白或难溶蛋白表达困难
操作便捷性
简单快捷，开盖即用，仅需加入 DNA 或 RNA 模板
对实验条件和操作技能要求高
应用灵活性
可使用 96 孔板或离心管进行反应，高通量筛选；修饰等更灵活
难以实现高通量表达和筛选
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Q:
合成的蛋白质可以使用哪些方法纯化？
A:可以使用镍磁珠纯化。
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Q:
是否需要在合成前纯化质粒或线性 DNA 模板？
A:说明DNA的质量对无细胞很关键，可以使用高品质的质粒小量制备试剂盒或 PCR 和 DNA 纯化试剂盒。
